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时间分辨荧光免疫法定量检测AFP 试剂盒临床应用研究
作者:管理员    发布于:2014-05-22 07:42:02    文字:【】【】【
摘要:对AFP 时间分辨荧光免疫法( TRFIA) 试剂盒进行研究,为临床应用评价提供科学依据.

时间分辨荧光免疫法定量检测AFP 试剂盒临床应用研究
徐伟文1 , 吴英松1 , 杭建峰1 ,王从容2 ,周志聪3 ,余伟鸿3 , 裘宇容2 ,李 明1
1. 南方医科大学热带病研究室,广东广州 510515 ;
2. 南方医科大学附属南方医院检验科,广东广州 510515 ;
3. 广州市达瑞抗体工程技术有限公司,广东广州 510663)
摘要:对自制AFP 时间分辨荧光免疫法( TRFIA) 试剂盒进行研究,为临床应用评价提供科学依据。收集血清标本450 份,分别以化学发光免疫分析(CL IA) 和RIA 为对照,用AutoDEL FIATM hAFP 试剂盒为复核试验,测定血样,获取实验数据并计算“真实性”和“可靠性”。结果表明,CL IA 及RIA 为对照试验,其阳性符合率分别为9910 %和97. 4 % ,阴性符合率分别为97. 2 %和94. 1 % ,检验均无显著性差异( P > 0. 05) 。本试剂盒的定量测定值与CL IA 比较接近,相关系数为0. 994 ,与RIA 为0. 917 ,两者相关性好( P < 0. 01) 。本试剂盒检测性能能满足临床应用的需要。

 血清AFP 检测对肝细胞癌有特异诊断价值[1 ] ,对筛查先天愚型和神经管畸形等新生儿缺陷也有很高的临床意义[ 2 ] 。本文建立AFP2TRFIA并对该试剂盒的准确度、精密度、剂量2反应曲线、最低检测量、稳定性和特异性等进行了测定和初步临床应用。材料与方法
1  材料
自制AFP2TRFIA 试剂盒,AFP2CL IA 试剂盒(Bayer 公司) , AutoDEL FIATM hAFP (Wallac 公司) ,AFP 2RIA 试剂盒(中国原子能科学院同位素所) 。国家AFP 质控品(QCII、QCIII ,期望浓度分别为65 、160ng/ mL) ,购自中国生物制品药品检定所。血清标本由南方医院检验科提供。阳性200份,阴性250 份,共450 份。考核对象入选标准以临床CL IA 法测定AFP 值为依据判断。实验仪器为Auto Delfia 1235 时间分辨荧光检测仪( PerkinElmer 公司) 。
2  方法
试验设计 AFP2TRFIA 试剂盒测定时,每个反应板上采用AFP 质控血清QCII、QCIII (各设双复孔) 进行质量控制,每一待测血样也各设双复孔。第一次试验结果的差异样本用自制试剂盒做重复试验(各设3 复孔) ,同时用DEL FIATM hAFP 试剂盒做复核试验(双复孔) 。试验操作均按各试剂盒说明书进行。
3  结果判断标准
质控血清 QCII、QCIII 的均值在允许范围内;重复样本的测定结果相差在10 %以内。如不能同时满足下述两个条件,则此反应板的试验结果无效,试验需重新进行。正常值范围 AFP2CL IA为0~8ng/ mL ,DEL FIATM hAFP 为0~8. 7 U/ mL(1U/ mL = 1. 21ng/ mL) ,自制AFP2TRFIA 为0~12U/ mL ,RIA 为0~20ng/ mL 。
4  统计处理
符合率计算 分别计算CL IA 及RIA 为对照的阴阳性符合率及总符合率,并进行t 检验。相关性分析 以CL IA 及RIA 为考核试验的对照标准,用SPSS11. 0 统计软件对数据进行分析和计算相关系数。
结  果
1  可靠性考核结果
对450 份临床血样进行测定,共用10 块反应板,每个板采用AFP QCII ( 65 ng/ mL ) 和QCIII(160 ng/ mL) 进行质量控制(各做双复孔) 。从各板内QCII、QCIII 所测浓度值及CV ( %) 结果。可见各板QC 均值在允许范围内,且重复样本的测定CV ( %) 在10 %以内。符合质控标准,试验可靠。
2  ROC 曲线及曲线下面积
将450 份临床血样的测定结果用SPSS11. 5统计软件进行分析,并绘制ROC 曲线(略) ,可见ROC 曲线从原点几乎垂直上升至接近左上角,然后水平达到右上角。ROC 曲线下面积(AZ ) 达0. 980 ,说明AFP2TRFIA 试剂盒的检测性能优越。
3  临床试验统计表
450 份血样的AFP2TRFIA 及CL IA、RIA 测定统计结果见表1 。从检验结果看,AFP2TRFIA与CL IA 及RIA 的检验效能均无显著性差异( P >0. 05) 。

AFP2TRFIA 与CL IA 比较的符合率:阳性符合率为9910 %;阴性符合率为97. 2 %;总符合率=(198 + 243) / 450 ×100 % = 98.0 %。AFP2TRFIA 与RIA 比较的符合率:阳性符合率为97. 4 %;阴性符合率为94. 1 %; 总符合率=(190 + 240) / 450 ×100 % = 95. 6 %。
4  相关性分析
TRFIA 测定450 份血样AFP 值与CL IA 及RIA 的测定值。结果表明, TFRIA 与CL IA 测定值的相关系数r = 0. 994 ( P < 0. 01) ,相关方程为Y = 1. 134 X - 1. 041 ,其中Y 代表TRFIA 测值, X代表CL IA 测值。而TRFIA 与RIA r = 0. 917 ( P< 0. 01) , Y = 0. 88 X + 2. 904 ,其中Y 代表TRFIA测值, X 代表RIA 测值。从相关系数及检验结果看, TRFIA 试剂盒与CL IA 或RIA 的相关性均良好。
5  差异血样的进一步分析
按RIA 法设定的cutoff 值( 20ng/ mL ) 及AFP2TFRIA 推荐的cutoff 值(14. 5ng/ mL ) , 450份血样中有9 份与RIA 测定值判断结果不符。以RIA 为对照标准,其中假阴性2 份,假阳性7 份。对这9 份血样用考核试剂盒试验(测定结果以FRIA2 表示) 及DEL FIATM hAFP 试剂盒的复核试验,同时参考本医院提供的CL IA 测值作进一步分析,结果见表2 和表3 。

由表可见,9 份差异血样重复试验结果及Wal2lac 复核结果符合率均达100 % ,说明自制试剂盒测定结果准确、稳定可靠。


讨  论

一种新的体外诊断试剂盒的灵敏性、重复性、准确性、精密性、特异性和可靠性等参数是首先必须考核的指标[3 ] 。同时通过对临床标本的检测,并将结果与同类产品(或方法) 比较和分析,也是考核试剂盒临床实际性能的重要内容,是综合评价新研发产品灵敏度和特异性的重要资料[ 4 ] 。有关体外诊断试剂的临床研究,我国尚没有出台相关法规进行规范。对于临床试验,标本的代表性、对照方法的可比性、试验方法的可靠性以及考核实施的管理是非常关键的环节。对被检测指标有“金标准”的,一定要与“金标准”进行比较,将平行检测入选标本得出的“阴阳性”结果与“金标准”比较,就可得出新试剂的灵敏度和特异性。没有金标准的,尽量与已批准的或国际公认的灵敏度和特异性较好的同类产品进行比较,比较的结果可以采用2 ×2 表统计。对于检测不一致的标本,应进一步的分析确证(如临床追踪或使用第三种试剂或方法检测) 。就本研究以CL IA 及RIA 为对照试验,其阳性符合率分别为9910 %和97. 4 % ,阴性符合率分别为97. 2 %和94. 1 % ,检验均无显著性差异( P >0. 05) ;自制试剂盒的定量测定值与CL IA 的测定值比较接近,相关系数为0. 994 ,与RIA 为0. 917 。综合对差异血样的进一步分析,表明本试剂盒检测性能与CL IA 相仿,且成本相对较低,能满足临床应用的需要。与RIA 比,本试剂盒在性能上要优于它(CL IA 和RIA) ,同时操作简单,费时短(3h) ,所需血清量少(25μL) ,且无放射性污染,如能进一步降低成本,有望取代RIA 肿瘤标志物检测。
参考文献:
[ 1 ] 沈铮,沈霞. 甲胎蛋白及其异质体检测的临床应用价值[J ] . 上海医学检验杂志,2000 ,15 (6) :361.
[ 2 ] 马燮琴, 顾学范. 新生儿筛查现状和展望[ J ] . 广东医学,2000 ,21 (7) : 533.
[ 3 ] 张庆生. 分析方法的验证[J ] . 中国新药与临床药理,1999 ,10(6) :376.
[ 4 ] 王瑞莲. 新药临床研究实用手册2设计、执行和分析[M] . 北京:化学工业出版社,2003.



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